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                利用超純水機制作的水在PCR試驗中能發揮哪些作用

                文章作者:超純水機 發布時間:2020-09-24 16:15:22 瀏覽次數:0

                  雖然現在新冠疫情已經得到了很好的控制,但是得新冠的患者一直都有,尤其是從國外入境的人員,入境后需要及時的做核酸檢測,在做核酸檢測的時候,常用的方法是PCR方法,而PCR對用水要求比較高,能夠滿足要求是利用超純水機制作的超純水,接下來我們將大家了解一下PCR和超純水。

                  一、什么是PCR技術?

                  PCR技術又稱為聚合酶鏈式反應。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的特點是能將微量的DNA大幅增加。

                超純水機

                  在新冠病毒檢測中,核酸檢測被定義為臨床診斷的金標準,RT-PCR技術被反復提到,它是一種將RNA反轉錄和PCR相結合的技術。首先在反轉錄酶.的作用下,將提取到的RNA合成cDNA,再以cDNA為模板,在DNA聚合酶作用下不斷擴增(變性-退火-延伸多個循環)合成目的片段并進行分析。

                  二、超純水機在PCR中的作用

                  PCR技術目前多搭配試劑盒使用,也有用戶自行制備反應體系,無論哪個過程都需要使用水。無論是近年來季節性爆發的甲流乙流,還是目前全球都在經歷的新冠病毒,在檢測過程中都涉及一個痛點,那就是如何盡可能提高核酸檢測的準確性,減少假.陰性結果出現的可能性。

                  我們首先分析一下假陰性結果出現的原因,以新冠病毒核酸檢測為例,假陰性的主要原因有:

                  1病人病程:不同病程,患者體內病毒載量不同;

                  2采樣部位:咽拭子、鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等不同采樣部位病毒載量均不同;

                  3采樣準確性:拭子質量,工作人員操作等;

                  4試劑盒的質量:引物設計以及水質控制。

                  為了順利將提取到的RNA反轉錄并實現DNA的成功擴增,一定要控制核糖核酸酶(RNases)的降解作用,如果試劑盒用水內含RNases,將極有可能導致假陰性結果的出現。

                  三、去除RNases的主要方法

                  1高壓滅菌:即便是在180°C下高壓滅菌4h之后,RNases仍保持某些活性,且某些細菌失活會釋放更多的RNases;

                  2 DEPC法(二乙基焦碳酸酯處理法) :利用二乙基焦碳酸酯(DEPC) 處理方法使酶失活是用來控制水溶液中RNases活性的常見方法。然而,二乙基焦碳酸酯是一種可疑致癌物,處理須小心;同時該方法雖然能夠使酶失活,卻無法將其從水中去除,同時清除多余的DEPC過程中,會產生乙醇,二氧化碳等其他污染物;

                  3超濾法:超濾是一種能夠從水溶液中清除RNases的方法。

                超純水機

                  四、超濾膜介紹

                  超濾膜被大量用于水處理工程。超濾技術在反滲透預處理、飲用水處理、中水回用等領域發揮著越來越重要的作用。超濾技術在酒類和飲料的除菌與除濁,藥品的除熱原以及食品及制藥物濃縮過程中均起到關鍵作用。

                  超濾過濾孔徑和截留分子量的范圍一直以來定義較為模糊,一般認為超濾膜的過濾孔徑為0.001-0.1微米,截留分子量(Molecular weigh cut-off, MWCO)為1,000-1,000,000 Dalton。嚴格意義上來說超濾膜的過濾孔徑為0.001-0.01微米,截留分子量為1,000-300,000 Dalton。若過濾孔徑大于0.01微米,或截留分子量大于300,000 Dalton的微孔膜就應該定義為微濾膜或精濾膜。

                  一般用于超純水水處理的超濾膜標稱截留分子量為30,000-300,000 Dalton,而截留分子量為6,000-30,000 Dalton 的超濾膜大多用于物料的分離、濃縮、除菌和除熱源等領域。

                  上述內容中總結了利用超純水機制作的水在PCR試驗中能發揮哪些作用,純水機是為數不多的一款安全過濾的水處理設備,它在處理的過程中,可以截留水里面的有害物質以及細菌,所以在醫療行業中用的比較多。

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